細胞名稱：NKM-1人白血病細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞

消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細胞轉入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉入液氮罐中。C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的 辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后

放到超凈臺內嚴格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據,不提供照片默認收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進

行對比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

YS2164CHHFK人毛囊角質細胞

YS2165CHUC人尿道上皮細胞

YS2166CSNU449人肝癌細胞

YS2167CA鼠主動脈平滑肌細胞

YS2168CVMM39人黑色素瘤細胞

YS2169CVMM5A人黑色素瘤細胞

YS2170C3LL小鼠肺癌細胞

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YS2172CRL人B細胞非霍奇金淋巴瘤細胞

YS2173CRCS大鼠軟骨肉瘤細胞

YS2174CROS17/2.8大鼠成骨細胞

YS2175CNCI-H23人非小細胞肺癌細胞

YS2176CNKM-1人白血病細胞

YS2177COCI-AML2人類急性髓細胞性白血病

YS2178CJ-111人單核細胞白血病細胞

YS2179CCESS人急性髓系白血病細胞

YS2180CMKN45人低分化胃癌細胞

YS2181CME-1人類急性髓細胞性白血病細胞

YS2182CNB-4人急性早幼粒白血病細胞

YS2183CRSC-364大鼠滑膜細胞

YS2184CSF767人腦瘤細胞

YS2185CRAEC大鼠主動脈血管內皮細胞

YS2186CRS1大鼠皮膚成纖維樣細胞

YS2187CC518大鼠膝關節(jié)退變軟骨細胞

YS2188CUMUC3人膀胱癌細胞

YS2189CCAL62人甲狀腺癌細胞

YS2190CA101D人黑色素瘤細胞

YS2191CBT20人乳腺癌細胞

YS2192CHVSMC人血管平滑肌細胞

YS2193CHS766T人胰腺癌細胞

YS2194CRBMVEC大鼠腦微血管內皮細胞

YS2195CHRCEC人視網膜微血管內皮細胞

YS2196CHSC-2人口底癌細胞

YS2197CSGC7901人低分化胃癌細胞

YS2198CWEHI-3B小鼠髓樣單核白血病細胞

YS2199COVHM小鼠卵巢癌

YS2200CQBI-293A腺病毒包裝人胚腎細胞

YS2201CHOCF人脈絡膜成纖維細胞

YS2202ChREC人視網膜內皮細胞

YS2203CHRMC人腎系膜細胞

YS2204COCI-LY18人B細胞淋巴瘤細胞

YS2205COCI-AML4人急性髓系白血病細胞

YS2206CPT67小鼠逆轉錄病毒包裝細胞

YS2207CTH1小鼠調節(jié)T細胞

YS2208CROMAS人Burkkit淋巴瘤細胞

YS2209CMARC-145猴腎細胞

YS2210CNCI-H187人視網膜母細胞瘤細胞

YS2211CHM1900人小膠質細胞

YS2212CTregs小鼠調節(jié)T細胞

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