細(xì)胞名稱：Walker256大鼠肝癌細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代:如果未超過80%匯合度時(shí),將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),

1)對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞

消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25瓶),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細(xì)

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細(xì)胞凍存:

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號(hào):C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時(shí)以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中。C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運(yùn)輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請(qǐng)將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對(duì)比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的 辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶,消毒后

放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進(jìn)

行對(duì)比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細(xì)胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

YS2231ChADSCs人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞

YS2232CC28/I2人正常軟骨細(xì)胞

YS2233CTPC1人甲狀腺癌細(xì)胞

YS2234CHT-ori3人正常甲狀腺細(xì)胞

YS2235CHUVSMC人臍靜脈平滑肌細(xì)胞

YS2236CMPC5小鼠腎足細(xì)胞

YS2237CPL45人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

YS2238CFL83B小鼠正常肝細(xì)胞

YS2239CSUM149PT人乳腺癌細(xì)胞

YS2240CKBM7人慢性髓白血病細(xì)胞細(xì)胞

YS2241CMH-S小鼠肺泡巨噬細(xì)胞

YS2242CMDA-MB-157人乳腺癌細(xì)胞

YS2243CMDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞

YS2244CBT-483人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

YS2245CEVSA-T人乳腺癌細(xì)胞

YS2246CMCF-12A人乳腺癌細(xì)胞

YS2247CHCC-1395人乳腺癌細(xì)胞

YS2248CWiDr人結(jié)直腸癌細(xì)胞

YS2249CML-2人急性髓單核細(xì)胞白血病細(xì)胞

YS2250C697人前B細(xì)胞白血病細(xì)胞

YS2251CRS4;11急性B淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

YS2252C95C人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞(低轉(zhuǎn)移)

YS2253CMahlavu人肝癌細(xì)胞

YS2254CSK-N-AS人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

YS2255CJG小鼠腎小球旁細(xì)胞

YS2256CNRK-49F大鼠腎正常成纖維細(xì)胞

YS2257CPan02人胰腺癌細(xì)胞

YS2258CJKT-1人精原瘤細(xì)胞

YS2259COV2008人卵巢癌細(xì)胞

YS2260CMMVECs小鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞

YS2261CLA795小鼠肺腺癌細(xì)胞

YS2262Ckasumi-1人急性髓系白血病細(xì)胞

YS2263COCI-LY10彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

YS2264CHSAS3人皮膚成纖維細(xì)胞

YS2265CNCCIT人畸胎瘤細(xì)胞

YS2266CNEC8人畸胎瘤細(xì)胞

YS2267CNTera-2人卵巢畸胎瘤細(xì)胞

YS2268CCPA47牛肺血管內(nèi)皮細(xì)胞

YS2269CCPAE牛肺血管內(nèi)皮細(xì)胞

YS2270CHPDLF人牙周膜成纖維細(xì)胞

YS2271CWalker256大鼠肝癌細(xì)胞

YS2272CRAOEC大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞

YS2273CIOSE80人正常卵巢上皮細(xì)胞

YS2274CalphaTC1clone6鼠胰島素瘤胰島a細(xì)胞

YS2275CU373人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

YS2276CSU-DHL-1彌漫性組織淋巴瘤細(xì)胞

YS2277CKit225IL-2依賴的人淋巴T細(xì)胞

YS2278CRASMC大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

YS2279CHD11雞巨噬細(xì)胞

YS2280CHConEpic人結(jié)膜上皮細(xì)胞

YS2281CBAEC牛主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

YS2282CEOMA小鼠血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞

YS2283CNHEK正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞

YS2284CHemECs人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞

YS2285CHFF人皮膚成纖維細(xì)胞

YS2286CIOSE-29人卵巢上皮細(xì)胞

YS2287CHUSMC人子宮平滑肌細(xì)胞

YS2288CCTXTNA2大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞

YS2289CAMC-HN-8人喉癌細(xì)胞

YS2290CDC2.4小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞

YS2291CL-6TG大鼠肌母細(xì)胞

YS2292CNCI-H209人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

YS2293CRMC-1鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞

YS2294CHLEC人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞

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