細胞名稱：HMSC-bm人骨髓血間充質(zhì)干細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞

消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中。C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)的一大優(yōu)勢在于能夠控制細胞繁殖的物理化學環(huán)境（即溫度、pH值、滲透壓、O2和CO2張力）和生理環(huán)境（即激素和營養(yǎng)濃度）。除溫度外，培養(yǎng)環(huán)境由生長培養(yǎng)基控制。雖然細胞培養(yǎng)的生理環(huán)境不如其物理化學環(huán)境明確，但是通過更好地了解血清成分、確定增殖所需的生長因子以及更好地了解培養(yǎng)過程中的細胞微環(huán)境（即細胞間相互作用、氣體擴散、細胞-基質(zhì)相互作用），現(xiàn)在可以采用無血清培養(yǎng)基進行一些細胞系的培養(yǎng)。

YS2390C人小腸癌細胞系

YS2391C SJCRH30人骨髓橫紋肌肉癌細胞

YS2392C 人腺癌細胞系

YS2393C Hela細胞耐藥亞株

YS2394C COC1細胞耐藥亞株

YS2395C 人原胚腎轉(zhuǎn)化細胞系

YS2396C 人胃癌細胞系

YS2397C 人胸腺激酶缺陷細胞系

YS2398C Burkitts淋巴瘤細胞系

YS2399C A-673人橫紋肌肉瘤細胞

YS2400C 膀胱癌細胞

YS2401C 急性骨髓性白血病細胞

YS2402C SV－40轉(zhuǎn)化肺成纖維細胞

YS2403C A2058人皮膚癌細胞

YS2404C 人乳腺癌細胞BcaP-37（暫不提供）

YS2405C 人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞

YS2406C T-24人膀胱移行細胞癌細胞

YS2407C EB-3人淋巴樣Burkitt淋巴瘤細胞

YS2408C L-CELLSL細胞

YS2409C 人肝癌細胞

YS2410C 表達HBV病毒的人肝細胞

YS2411C 人口腔癌細胞

YS2412C B淋巴細胞

YS2413C 人小細胞肺癌

YS2414C 人前列腺正常細胞

YS2415C 上頜牙齦癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌

YS2416C 宮頸癌細胞

YS2417C 人血液白血病細胞

YS2418C 急性淋巴細胞

YS2419C 人外周血淋巴細胞

YS2420C 胸膜積液B淋巴細胞

YS2421C 人舌鱗狀細胞癌細胞

YS2422C 人骨肉瘤細胞

YS2423C 人乳腺癌細胞

YS2424C 人骨髓瘤細胞株

YS2425C 人外周淋巴細胞

YS2426C EB病毒感染的人外周淋巴細胞

YS2427C 人胚肺成纖維細胞

YS2428C 人肺腺癌細胞

YS2429C 人橫紋肌肉瘤細胞

YS2430C 人黑色素瘤細胞

YS2431C 人肺鱗癌細胞

YS2432C 人B淋巴瘤細胞系

YS2433C 人前列腺癌細胞

YS2434C 人肺巨細胞癌高轉(zhuǎn)移系

YS2435C 男性正常龜頭細胞系

YS2436C HUMSC臍帶血來源人MSC細胞人臍帶血間充質(zhì)干細胞

YS2437C H9人類胚胎干細胞

YS2438C 人子宮異位內(nèi)膜上皮細胞細胞系

YS2439C BG01V人類胚胎干細胞

YS2440C DYR0100人誘導型多能干細胞

YS2441C DYP0530人誘導型多能干細胞

YS2442C TTA1人甲狀腺癌細胞

YS2443C HFF人包皮成纖維細胞

YS2444C HN4人類胚胎干細胞

YS2445C B-CPAP人甲狀腺癌細胞

YS2446C H1人類胚胎干細胞

YS2447C HMSC-bm骨髓來源人MSC細胞人骨髓血間充質(zhì)干細胞

YS2448C HMSC-ad脂肪來源人MSC細胞人脂肪間充質(zhì)干細胞

YS2449C CAL-62人甲狀腺癌細胞

YS2450C HK-2人腎上皮細胞

YS2451C HTh-7人甲狀腺癌細胞

YS2452C Hth83人甲狀腺癌細胞

YS2453C KHM-5M人甲狀腺癌細胞

YS2454C KMH-2人甲狀腺癌細胞

YS2455C Ocut-2C人甲狀腺癌細胞

YS2456C MDA-MB-436人乳腺腺癌細胞

YS2457C NIH:OVCAR-3人卵巢癌細胞

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