維生素C(Vitamin C)又稱L-抗壞血酸(AsA)，是高等靈長類動物與其他少數(shù)生物的必需營養(yǎng)素，在生物體內(nèi)維生素C是一種抗氧

化劑，為酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸內(nèi)酯，保護(hù)身體免于自由基的威脅，同時也是一種輔酶，其廣泛的食物來源為各類

新鮮蔬果。Vc有L-型和D-型兩種異構(gòu)體，只有L-型的才具有生理功能，還原型和氧化型都有生理活性。

(DHA)檢測試劑盒(菲咯啉比色法)檢測原理是利用還原劑將脫氫抗壞血酸還原成還原型抗壞血酸，

在酸性條件下維生素C(抗壞血酸)把三價鐵離子還原成亞鐵離子，后者與菲咯啉形成穩(wěn)定的紅色螯合物，以酶標(biāo)儀534nm處檢測

吸光度，在一定濃度范圍(樣品濃度控制在10~250μg/ml)吸光度與抗壞血酸含量呈線性關(guān)系，獲得抗壞血酸含量。該試劑盒主要

用于植物組織中的維生素C(抗壞血酸)的檢測，計算出總抗壞血酸含量，從中減去樣品中原有的還原型抗壞血酸含量，即得脫氫抗

壞血酸含量。優(yōu)點(diǎn)是：1、反應(yīng)穩(wěn)定，不易褪色；2、操作簡便；3、還原糖及其他常見的還原物質(zhì)對實驗沒有干擾，因此專一性

好；4、靈敏度高。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項:

1、實驗材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點(diǎn)不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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