5?-核苷酸酶(5?-NT或NTP)廣泛分布于肝臟、膽道及其他各種組織中，該酶活性變化常與ALP活性相平行。但在骨骼系統(tǒng)的疾病

中，如腫瘤骨轉(zhuǎn)移、畸形性骨炎、甲亢、佝僂病等，ALP活力增高，但是5?-NT活力正常，所以對于ALP活力提高的情況，

測定5?-NT活力有助于判斷ALP活力增高原因是肝膽系統(tǒng)疾病還是骨骼系統(tǒng)疾病。

5′-核苷酸酶(5′-NT)檢測試劑盒(鉬藍(lán)比色法)的檢測原理為5?-核苷酸酶能催化5?-磷酸腺苷(AMP)水解，生成腺苷和

磷酸，后者與鉬酸銨反應(yīng)生成鉬藍(lán)，可用比色法測定無機(jī)磷的含量，計算5?-NT活性，利用鎳離子能選擇性的抑制5?-NT的特性

，在測定管不加人抑制劑鎳離子，測出的活性為ALP和5?-NT總活性，在對照管加入鎳離子，可以測出ALP的活性，

測定管的酶活性減去對照管的酶活性即獲得5?-NT活性，通過酶標(biāo)儀檢測680nm處吸光度。5?-核苷酸酶的檢測對于研究自由基

代謝平衡，抗衰老和腫瘤發(fā)病機(jī)制具有一定的價值。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測。

③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設(shè)置對照孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并

注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調(diào)零)，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案)，以對照孔為對照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對照孔為對照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項∶

1、待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時需避免反復(fù)凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應(yīng)盡快檢測，亦可-20°℃保存。

3、如果沒有可測定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板，也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測體積。

4、每次檢測指標(biāo)不宜過多，否則操作時間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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