Equi-phi29 DNA Polymerase試劑是phi29的改造體，并經多次純化分離而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的鏈置換、連續(xù)合成特性（>70kb）的基礎上，提高了滾環(huán)擴增的反應溫度，該酶酶可以在42℃條件下持續(xù)的進行DNA合成（而phi29 DNA 聚合酶在此溫度下反應活性很低）。

這種高溫的反應特性，在以下幾個方面對實驗有明顯的提升：（1）在NGS測序中，其提升了高GC含量、回文結構等復雜模板的延伸能力，使得NGS的覆蓋度更均一，降低測序所需深度；（2）高溫的反應條件，提升了基因組DNA的WGA產物的合成量，并可以進行變溫擴增；（3）降低測序中Gap區(qū)域，提升單細胞測序的數據質量和完整度；（4）降低非特異性擴增產物；（5）提升MDA/RCA等實驗的擴增性能和特異性。

此外，Equi-phi29 DNA Polymerase仍然具有很強的3’-5’外切酶校讀功能，合成的DNA片段保真性高。該酶的外切酶活性較強，因此合成過程中引物需要3’端硫代修飾，以降低外切活性對引物的切割效應。

主要特征

鏈置換能力

連續(xù)合成能力

擴增的高保真性

應用

DNA恒溫滾環(huán)擴增

需強鏈置換和DNA連續(xù)合成的反應

質粒快速復制

高保真快速復制

儲存

-20℃可保存3年。

Equi-phi29 DNA Polymerase試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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