Bsu DNA聚合酶 大片段試劑聚合酶是具有鏈置換活性的DNA恒溫擴(kuò)增聚合酶，主要應(yīng)用于RPA重組酶擴(kuò)增。重組酶UvsX與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列；一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)，Bsu DNA聚合酶啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。

本Bsu DNA 聚合酶來源于 嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillus subtilis），系將Bacillus subtilis DNA 聚合酶（Bsu） I 基因的前296個AA截去而得。該酶保留了Bsu I 的 5′-3′ 聚合酶活性，但是缺失了 5′-3′ 核酸外切酶結(jié)構(gòu)域，該酶自身缺失 3′-5′ 核酸外切酶活性，可用于重組酶擴(kuò)增。

應(yīng)用

隨機(jī)引物法標(biāo)記

cDNA 第二條鏈的合成

單個 dA 的加尾

鏈置換的 DNA 合成

活性定義

在37℃條件下，30min內(nèi)參入10nmol酸性不容物定義為1個活性單位。

Bsu DNA聚合酶 大片段試劑聚恒溫擴(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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