加A聚合酶（E.coli）試劑為高效加A聚合酶，該酶以RNA為模板在RNA的3′末端加入20~200個(gè)A堿基?？蓱?yīng)用于增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性，

及microRNA加A尾，為cDNA合成提供oligo-dT引物結(jié)合位點(diǎn)等。生產(chǎn)的PolyA聚合酶是E.coli來(lái)源的，

該酶是以單鏈RNA 作為模板，ATP作為底物進(jìn)行聚合反應(yīng)的。

組分

組分名稱(chēng)數(shù)量

Poly(A) Polymerase(5U/μl)20 μl/200 μl

10XEPAP Reaction Buffer500 μl

10 mM ATP100 μl/500 μl

25 mM MnCl2500 μl

來(lái)源

重組表達(dá)的E.coli來(lái)源的Poly(A)聚合酶。

單位定義

在37℃、pH7.9 的條件下，以ATP 為底物，10 分鐘內(nèi)把1 nmol的AMP 聚合到RNA上所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位（U）。

應(yīng)用

RNA 3' 標(biāo)記增強(qiáng)RNA穩(wěn)定性microRNA加A尾，為cDNA合成提供oligo-dT引物結(jié)合位點(diǎn)

儲(chǔ)存

-20°C可保存2年。

加A聚合酶（E.coli）試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀(guān)察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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