ThermoStable Afu Uracil DNA GlycosylaseAfu UDG (2U/µl)試劑耐熱尿嘧DNA糖基化酶），它是大腸桿菌尿啶DNA糖基化酶的耐熱同源蛋白。該酶能有效地水解單鏈或雙鏈DNA上的尿嘧(dUMP)，產(chǎn)生缺嘧啶位點(diǎn)(AP)，在高溫或高pH下，極易水解斷裂。該酶極度耐熱，在95℃條件下仍然能保持全部的活性，最佳反應(yīng)溫度為50-75℃。該酶不需要金屬離子作為輔助因子。

活性定義

在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下，65°C每分鐘催化60 pmol 尿啶從含尿嘧的雙鏈DNA上釋放所需要的酶量為一個(gè)活性單位。

儲(chǔ)存

-20℃可保存2年。

酶保存液

20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。

Afu UDG (2U/µl)試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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