ThermoStable dsAP Nuclease試劑 (耐熱dsAP核酸內(nèi)切酶) 來(lái)源于嗜熱菌，是一種熱穩(wěn)定的特異性識(shí)別雙鏈脫嘌呤/脫嘧(AP)位點(diǎn)的核酸內(nèi)切酶。該酶可切割A(yù)P位點(diǎn)5’端的第一個(gè)磷酸二酯鍵，產(chǎn)生3′羥基和5′脫氧核糖磷酸末端(deoxyribose phosphate, dRP)。該酶作用底物為雙鏈DNA(含AP位點(diǎn))，對(duì)單鏈DNA(含AP位點(diǎn))、ssDNA、dsDNA無(wú)活性。該酶的最佳活性溫度為60-70°C，在85°C以上溫度逐步失活。

組分

單位定義

一單位指，在10µl反應(yīng)體系中，60°C反應(yīng)15min，切割1 pmol 含一個(gè)AP位點(diǎn)的寡核苷酸雙鏈，所需要的酶量。

儲(chǔ)存

置于-20°C，可保存2年。

ThermoStable dsAP Nuclease試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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