細(xì)胞名稱：U251成纖維細(xì)胞人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

細(xì)胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作，將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)前的工作準(zhǔn)備充分

包括耗材的處理、試劑的配置，無菌檢驗等等。

玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿（細(xì)胞瓶、裝營養(yǎng)液的瓶子、小青m素瓶等）要先用洗衣粉刷干凈（注意死角），然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 10 遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎，160℃ 干烤 2 h 待用。

試劑配置。細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

無菌檢驗。主要采用過濾除菌：如抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉等。有些可以采用高壓滅菌，如 PBS、D-Hank's等。

試劑分裝保存

包括營養(yǎng)液、血清等。

血清特別重要。血清必須貯存于 –20℃，如果一次無法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青m素瓶保存。一般廠商提供的血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。（一般情況下不影響細(xì)胞培養(yǎng)）

瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

熱滅活是指 56℃，30 分鐘加熱已解凍之血清。水浴鍋升到 56℃后，將血清放入，待溫度升高到 56℃ 后計時，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清（包括不同批次）對細(xì)胞的影響。

注意事項：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

YS750CPATU8988人胰腺癌細(xì)胞

YS751CHepG-2人肝癌細(xì)胞

YS752C3B2.1-7Hep人肝癌細(xì)胞

YS753CH-97人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞

YS754CNCI-N87N87]人胃癌細(xì)胞

YS755CMKN45人胃癌低分化細(xì)胞

YS756C紡錘形貼壁MEMMDA-MB-435S人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

YS757C樣MDA-MB-453類上皮細(xì)胞人乳腺癌細(xì)胞

YS758C(ATCC)T47D人乳腺癌細(xì)胞

YS759CSw626人卵巢腺癌細(xì)胞

YS760CcloneFGCLNcap人前列腺癌細(xì)胞

YS761C成纖維細(xì)胞瘤細(xì)胞人腦膠質(zhì)母細(xì)胞

YS762CU251成纖維細(xì)胞人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

YS763CCRT成纖維細(xì)胞人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

YS764C成纖維細(xì)胞瘤細(xì)胞人膠質(zhì)母細(xì)胞

YS765CSHG-44成纖維細(xì)胞人膠質(zhì)瘤細(xì)胞

YS766CSF-295成纖維細(xì)胞人XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞

YS767CSH-SY5Y瘤細(xì)胞人神經(jīng)母細(xì)胞

YS768C淋巴母細(xì)胞瘤細(xì)胞人淋巴細(xì)胞

YS769C淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞人急性淋巴母細(xì)胞

YS770CK562淋巴母細(xì)胞人白血病細(xì)胞

YS771CHL-60原粒細(xì)胞人白血病細(xì)胞

YS772CU937單核細(xì)胞人白血病細(xì)胞

YS773C白血病細(xì)胞、急性早幼粒細(xì)胞人白血病細(xì)胞

YS774C淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞人T細(xì)胞

YS775C淋巴T細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞人急性淋巴細(xì)胞

YS776C單核細(xì)胞白血病細(xì)胞人單核細(xì)胞

YS777C淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞人紅白細(xì)胞

YS778COSU-2人骨肉瘤細(xì)胞

YS779CMG-63成纖維細(xì)胞人成骨肉瘤細(xì)胞

YS780CMuM-2C人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞

YS781CMuM-2B人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞

YS782CRaji淋巴母細(xì)胞人Burkitt`s淋巴瘤細(xì)胞

YS783CNAMALWA淋巴母細(xì)胞人Burkitt`s淋巴瘤細(xì)胞

YS784C97-L低轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞

YS785CM1淋巴母細(xì)胞小鼠白血病細(xì)胞

YS786CL1210淋巴母細(xì)胞小鼠白血病細(xì)胞

YS787CP388D1淋巴母細(xì)胞小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞

YS788CNFS-60G-CSF依賴性淋巴母細(xì)胞小鼠白血病細(xì)胞

YS1175P小鼠全骨髓原代細(xì)胞

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